유전자 총 사용법

1. 재료 준비

얇은 배지 층을 9 cm2 배양 접시에 놓고 직경 3 cm의 접시 중앙에 재료 (일반적으로 미성숙 배아, 성숙 배아, 작은 캘러스, 현탁 세포, 원형질체 등)를 도말했다. .

2, 금 분말의 처리

원심 분리 튜브에 60mg 금 분말 또는 텅스텐 분말을 넣고 1ml 절대 에탄올을 넣고 3 분간 잘 흔들어 섞어 9615g에서 1 분간 원심 분리하고 상층 액을 제거한 후 멸균 된 물 1ml를 넣고 잘 섞어 9615g에서 원심 분리하고 위의 3 단계를 반복하십시오. 타임스. 마지막으로, 금 분말을 1 ml의 멸균 증류수에 현탁시키고 4 ℃ 또는 실온에서 저장 하였다.

3, DNA 가공

50tA의 금 분말 현탁액을 취하여 5 번째 plasmid DNA (1.0 / lg ~ 1) 용액, 50㎕

0.1 mol / L 스 페르미 딘 (사용 된 용액은 멸균 멸균 처리)을 3 분간 흔들어 주면서 실온에서 10 분간 방치 한 후 9615 g에서 10 초간 원심 분리하여 상등액을 버렸다. 250 ~ 1 개의 절대 에탄올을 넣고 10 초 동안 9615 g에서 원심 분리기로 흔들어 섞고 뜨는 물을 버린다. 펠렛을 60/1의 무수 에탄올에 재현 탁하고 5 회 주사 (10 회 / 1 회) 하였다.

4, 유전자 총의 작동

유전자 총의 모든 조작은 다음과 같이 무균 조건 하에서 수행됩니다 :

1) 유전자 건의 표면과 70 % 에탄올로 샘플 챔버를 소독하십시오. 동시에, 배리어 네트 및 절단 가능한 디스크, 미세 탄성 캐리어, 홀더 및 고정 도구를 70 % 에탄올로 15 분간 담근 후 깨끗한 벤치에 놓아 건조시켰다. 분할 식 다이어프램, 고정식 커버 및 마이크로 탄성 캐리어 발사 장치는 70 % 에탄올로 표면을 살균하고 건조시킬 수 있습니다.

2) 미립자 슬라이드를 고정 링에 넣고 미립자 슬라이드 중앙에 DNA와 금 가루 혼합물을 넣고 약 1 분 동안 건조시킵니다.

3) 파열 가능한 멤브레인을 홀더에 설치하고 시계 방향으로 가스 가속기쪽으로 돌립니다.

4) 공간 링, 블로킹 네트, 블로킹 네트 홀더, 파티클 캐리어 및 고정 링 (입자가 아래를 향하게 한면)을 설치하고 커버를 조이고 그립에 삽입하십시오.

5) 시료를 폭격 챔버에 넣고 문을 닫습니다.

6) 헬륨 실린더의 메인 밸브를 열고 헬륨 레귤레이터 밸브를 시계 방향으로 돌려 압력 게이지 포인터의 표시가 다이어프램 압력 200Psi (= 1.379MPa)보다 높게 설정하십시오.

7) 유전자 건과 변압기 스위치를 켜십시오.

8) 진공 버튼을 누릅니다. 진공 상태가 26-28 in Hg (= 88.05 ~ 94.82kPa) 일 때, Hold 버튼을 빠르게 누른 다음, launch 버튼을 누른 상태에서 활성화시킵니다.

9) 진공 테이블이 제로로 된 후에 벤트 키를 눌러 샘플을 리셋하십시오.

10) 시스템 종료.

헬륨 실린더의 메인 스위치를 조이고 비어있는 건을 누르고 압력 게이지의 포인터를 제로로 돌려 놓은 다음 압력 게이지 조정 밸브를 반 시계 방향으로 돌리십시오. 유전자 건과 변압기 스위치의 메인 스위치를 끄십시오.